ADVERSE DRUG REACTION MONITORING AMONG HYPERTENSIVE PATIENTS OF TERTIARY CARE CENTER OF NORTH INDIA RELATED TO ANTIHYPERTENSIVE DRUGS

Objective: The objective of the study was to monitor the adverse drug reactions (A.D.Rs.) associated with antihypertensive drugs. Methods: All patients coming to the department with blood pressure systolic above 120 mmHg and diastolic above 90 mmHg and prescribed hypertensives will be screened for the study. Results and Discussion: A total of 136 patients were observed during the study. Out of 136 patients, 23 (17%) A.D.Rs. were recorded. A study conducted by Ramesh et al. in the Indian capital reports that 22.3% of the patients experienced A.D.Rs. Conclusion: Furthermore, any appearance of A.D.Rs. due to side effects of the drugs or due to bad control and patients non-compliance, it was treated mainly by decreasing the doses of the drugs, switching them to another active substance from the same pharmacological group, or by adding more active substances from different pharmacological groups in lower dosages to achieve the B.P goals

The conserved ubiquitin-like protein Hub1 plays a critical role in splicing in human cells

Different from canonical ubiquitin-like proteins, Hub 1 does not form covalent conjugates with substrates but binds proteins non- covalently. In Saccharomyces cerevisiae , Hub 1 associates with spliceosomes and mediates alternative splicing of SRC 1 , without affecting pre-mRNA splicing generally. Human Hub 1 is highly similar to its yeast homolog, but its cellular function remains largely unexplored. Here, we show that human Hub 1 binds to the spliceosomal protein Snu 66 as in yeast; however, unlike its S. cerevisiae homolog, human Hub 1 is essential for viability. Prolonged in vivo depletion of human Hub 1 leads to various cellular defects, including splicing speckle abnormalities, partial nuclear retention of mRNAs, mitotic catastrophe, and consequently cell death by apoptosis. Early consequences of Hub 1 depletion are severe splicing defects, however, only for specific splice sites leading to exon skipping and intron retention. Thus, the ubiquitin-like protein Hub 1 is not a canonical spliceosomal factor needed generally for splicing, but rather a modulator of spliceosome performance and facilitator of alternative splicing

Sero-prevalance of Cryptococcal Antigenemia in HIV Positive Individual having CD4 Counts

Cryptococcus neoformans is one of the foremost common opportunistic infectious agents in people living with Acquired Immuno Deficiency Syndrome (AIDS). It has been reported to cause about 1 million cases of cryptococcal meningitis per year among HIV/AIDS and 600,000 deaths annually. This study was done to find the prevalence of Cryptococcal antigenemia among HIV positive individuals having CD4counts <100 cells/mm3. A cross-sectional study was conducted in the HIV Reference unit, National public health laboratory from July to December 2015. The study comprised of 99 HIV positive individuals having CD4counts <100 cells/mm3. CD4 T cell count was performed by flow cytometry (BD Biosciences, San Jose, CA, USA) and Cryptococcal antigen test by Latex agglutination assay. The overall prevalence of cryptococcal antigenemia was found to be 18.2%. Of the total ninety-nine subjects enrolled in the study, 72 (72.8%) were males and 27 (27.2%) were females. The mean age of the patients was 38 years ranging from 13 to 69 years. Higher percentage of female (22.2%) showed Cryptococcal infection in our study as compared to male (16.7%). The study concludes higher prevalence of Cryptococcal antigenemia among HIV infected individuals and recommends Cryptococcal antigen screening to be made mandatory in HIV positive patients having CD4 T cells count below 100/μl

Tomato heat stress transcription factor HsfA1 as master regulator of thermotolerance

The heat stress (hs) response is universal to all organisms. As the cell senses increase in temperature, heat stress transcription factors (Hsfs) are activated to upregulate the expression of a number of genes encoding heat stress proteins (Hsp) which act as molecular chaperones to protect cells against heat damages. In higher plants, the phenomenon seems to be unusually complex both at the level of Hsfs and Hsps (e.g., 21 Hsf encoding genes in Arabidopsis and at least 17 in tomato). Upon prolonged hs, another characteristic property of plant cells is the assembly of large cytosolic aggregates called heat stress granules (HSG), which are composed of Hsps, HsfA2, RNA and RNA-binding proteins. The present work was aimed to understand plant hs response using tomato as a model system. To study the function of tomato Hsfs in their native system, we generated transgenic tomato lines altered in expression of HsfA1, HsfA2, and HsfB1. Tomato plants with 10-fold overexpression of HsfA1 (OE plants) were characterised by integration of a single HsfA1 expression cassette, whereas the plants harbouring a tandem inverted repeat (IR) of the cassette showed cosuppression of HsfA1 (CS plants). The lack of HsfA1 expression in CS plants results from posttranscriptional gene silencing connected with the formation of small interfering RNA (siRNA). Under normal growth conditions, major developmental features were similar for wild-type (WT), OE and CS plants. However, in contrast to the former two, CS plants and fruits were extremely sensitive to elevated temperature because hs-induced synthesis of major chaperones and Hsfs was strongly reduced or lacking. Despite the complexity of the plant Hsf family, the function of tomato HsfA1 is unique as master regulator of induced thermotolerance. On the other hand, maintenance of essential chaperones in CS plants during seed development suggests involvement of other Hsfs and/or transcription factor(s). HsfB1 and HsfA2 transgenic tomato plants, unaffected in thermotolerance, further supported the function of HsfA1 as the major factor regulating hs-inducible genes. Hs87 independent phenotypes of plants with altered expression of HsfB1 indicates developmental role of this Hsf. Using transient reporter assays with mesophyll protoplasts from WT tomato, we demonstrated that plasmids encoding Hsfs A1, A2 and A3 were well expressed which could function as activators for reporter gene expression. However, in protoplasts derived from CS plants, plasmids encoding HsfA2 and HsfA3 were normally expressed but even higher amounts of HsfA1 expression plasmids were completely silenced. Therefore, silencing of HsfA1 in CS plants was also reproduced in its mesophyll protoplasts. Lacking thermotolerance in CS protoplasts could be restored after transformation with expression plasmids encoding functionally equivalent HsfA2 or HsfA3 resulting in (i) expression of chaperones, (ii) survival of the cells at otherwise lethal temperature, (iii) thermoprotection of firefly luciferase, and (iv) assembly of heat stress granules (HSGs). The strong silencing caused by an IR in CS plants opened the possibility of a broad use of RNAi for gene knock-down also in the transient system of mesophyll protoplasts. Using this technology, we attempted to dissect essential components of thermotolerance and HSG assembly. We demonstrated the previously reported function of chaperones such as Hsp70 and Hsp101, and could discriminate the in vivo chaperone functions of different isoforms of Hsp20 and Hsp70 proteins. Hsp17-CI, Hsp70 (hs-inducible isoforms), and Hsp101 are absolutely essential chaperones for thermotolerance in plants. Furthermore, the results also show that despite Hsp17-CI and -CII being major components of HSG complexes, they are dispensable for assembly of these complexes. Based on these results, it is proposed that in the transient protoplast system an approach with gene-specific IRs can be used to discriminate functions of closely related isoforms among protein-families and to dissect complex protein networks.Aufgrund der sessilen Lebensform sind Pflanzen in besonderer Weise den ständig wechselnden Umweltbedingungen ausgesetzt. Das erfordert ein ungewöhnliches Mass an Anpassungsfähigkeit, damit Überleben und Entwicklungsfähigkeit mit Blüten-, Frucht- und Samenbildung auch unter diesen Umständen gewährleistet sind. Im Vergleich mit anderen Organismen, ist ein auffälliges Merkmal von Pflanzen die Komplexität der Stressantwortsysteme. Das gilt in besonderer Weise für die Vielfalt von Chaperonen und regulatorischen Proteinen (Hitzestresstranscriptionsfaktoren, Hsf), die die Antwort auf erhöhte Temperaturen (Hitzestressantwort) kennzeichnt. Die jüngsten Erfolge der Genomanalyse bei Arabidopsis und Reis sowie die Verfügbarkeit von umfangreichen internationalen Datenbanken mit sogenannten expressed sequence tags (ESTs) haben ergeben, dass insgesamt mehr als 20 Hsfs, die in drei unterschiedlichen Strukturklassen eingeteilt werden können, in irgend einer Weise an der Regulation der Hitzestressantwort bei Pflanzen beteiligt sind. Ziel der Arbeit war die Untersuchung von Tomatenmutanten mit veränderten Expressionsmustern von Chaperonen und Hitzestresstranscriptionsfaktoren, um Einblicke in die funktionelle Diversifizierung der beteiligten Komponenten zu erhalten. Ausgangspunkt waren Tomatenpflanzen mit Insertionen von Sense- und Antisense- Kassetten für HsfA1, HsfA2 und HsfB1. Entscheidend für die Entwicklung der experimentellen Arbeiten war zunächst eine einzige primär transgene T0 Pflanze mit mehreren Insertionen der Sense Kassette von HsfA1, die im Verlauf unserer weiteren Züchtungsarbeiten in mehrere Linien aufspaltete. Eine Linie mit einer einzigen Transgenkassette hatte eine etwa 10-fach erhöhte Expression von HsfA1 (overexpression line OE). Zwei weitere Linien waren gekennzeichnet durch eine Tandem Integration von 2 Transgenkassetten mit invertierter Anordnung (IR). Dieses führt zu Cosuppressionseffekten (CS2 und CS3 Linien), d.h. nicht nur die Expression des Transgens sondern auch die des Endogens von HsfA1 wird unterbunden. Die Zahl der eingebauten Kassetten im Genom und ihre Anordnung wurden mit Hilfe von Southern Blots und PCR Analysen aufgeklärt. Nach der Aufspaltung und Selektion der homozygoten Linien waren die Erbeigenschaften und Phänotypen der drei erhaltenen Linien (OE, CS2, CS3) über viele Generationen stabil. Der molekulare Mechanismus der Cosuppression konnte in unserem Fall eindeutig auf die Bildung von sogenannter „interference RNA“ (RNAi) zurückgeführt werden. Die Anordnung der beiden Transgenkassetten als inverted repeat (IR) führt zur Synthese von mRNA Molekülen mit Informationen vom Sense- und Antisensestrang des HsfA1 Gens. Die daraus resultierende Bildung von RNA-Haarnadelstrukturen wird in den Zellen von einem Endonukleasekomplex als abartig erkannt (DICER Komplex) und in kurze Doppelstrang RNA Fragmente von etwa 21 Nukleotiden zerlegt. Diese dienen als Führungs-RNA (guide RNA) für einen weiteren RNAse Komplex (RISC Komplex), der die selektive Zerstörung der HsfA1 mRNA bewirkt. Der ganze Prozess wird als posttranscriptional gene silencing (PTGS) bezeichnet. Durch Auftrennung der Fraktion kleiner RNAs aus Tomatengewebe und entsprechende Hybridisierung konnten wir die Existenz dieser RNAi Moleküle in den CS Pflanzen nicht aber in WT und OE Pflanzen nachweisen. Überraschend waren die tiefgreifenden Auswirkungen der veränderten Expression von HsfA1 in den transgenen Pflanzen. Im Vergleich zu Wildtyp-Pflanzen war in den HsfA1 Überexpressionslinien (OE) die Expression der Hitzestress-induzierten Gene stark gesteigert und fand in einigen Geweben auch unabhängig von einer Stressinduktion statt. Im Gegensatz dazu fehlten praktisch alle Hitzestress-induzierten Proteine in den Cosuppresionsslinien (CS). Das war deshalb überraschend, weil wir angenommen hatten, dass der Expressions Knock-out eines der 20 Hsfs durch die Aktivität verwandter Hsfs ausgeglichen werden könnte. Das ist offensichtlich nicht der Fall. HsfA1 ist der Master-Regulator der Hitzestressantwort in Tomate. Bei Versuchen mit Tomatenpflanzen im Gewächshaus unter den erhöhten Stressbedingungen des Sommers 2003 oder aber auch in Klimakammern mit erhöhten Temperaturen konnte man die drastischen Folgen des Ausfalls von HsfA1 direkt beobachten. Die Pflanzen im vegetativen Zustand waren gegenüber dem Wildtyp extrem Temperatur-empfindlich, und die Fruchtreifung kam vollständig zum Erliegen. Auf der anderen Seite haben wir keinerlei Unterschiede in Wachstum und Entwicklung (Blütenansatz, Fruchtreifung, Samenkeimung etc.) zwischen den drei Linien beobachtet, wenn sie bei 25°C gehalten wurden. Auch die entwicklungs-spezifische Expression von Chaperonen bei der Samenreifung war unverändert. Offensichtlich spielt HsfA1 dabei keine nennenswerte Rolle. Es wird sogar während der Samenreifung selektiv abgebaut und wird erst in der frühesten Phase der Samenkeimung wieder nachweisbar. Dieser interessante Vorgang liess sich sehr klar am Beispiel der OE Pflanzen belegen. Zur experimentellen Verifizierung der an ganzen Pflanzen beobachteten Effekte wurde ein transientes Genexpressionssystem mit Mesophyllprotoplasten aus steril angezogenen Tomatenpflanzen der drei Linien (WT, OE, CS3) neu etabliert. Entsprechend unseren langjährigen Erfahrungen mit Tabakmesophyllprotoplasten, lassen sich auch die Tomatenprotoplasten relativ einfach in Gegenwart von Polyethylenglykol transformieren und zu Reporterassays und in situ Chaperonassays nutzen. Die Ergebnisse mit Protoplasten aus den CS3 Pflanzen sind besonders aufschlussreich. Die durch den Ausfall von HsfA1 fehlende Kapazität zur Expression von Hitzestressinduzierten Genen und damit zur Ausbildung von Themotoleranz kann durch Tranformation mit verschiedenen, nahe verwandten Hsfs repariert werden (HsfA2, HsfA3, HsfA4b). Diese durch entsprechende Expressionsplasmide eingebrachten Hsfs sind also funktionell äquivalent zu HsfA1 und können ihn sogar in der Stärke der Genexpression übertreffen, aber sie stehen in den ganzen Pflanzen nicht zur Verfügung. Warum das so ist, konnten wir nur für HsfA2 eindeutig klären. Dieser ist ein strikt Hitzestress-induziertes Protein und daher in seiner Expression ebenfalls von HsfA1 als Masterregulator abhängig. Im Rahmen meiner Untersuchungen habe ich auch andere transgene Tomaten-Linien einbezogen, in denen die Expression von HsfA2 und HsfB1 durch Antisense Konstrukte ausgeschaltet waren, und eine Linie mit Überexpression von HsfB1. Unabhängig von den Testbedingungen (Kontrolle oder Hitzestress) waren die Phänotypen bei weitem nicht so deutlich wie bei den Linien mit geänderter Expression von HsfA1. Dennoch sind zwei Beobachtungen sehr aufschlussreich für die Beurteilung der besonderen Rolle von HsfB1 für die Entwicklung der Pflanzen. Die konstitutive Expression von HsfB1 in den HsfB1 Sense Pflanzen führt zu einem gedrungenen Wachstum und vorzeitigem Fruchtansatz, während das Fehlen von HsfB1 in den Antisensepflanzen zwar keinen sichtbaren Effekt auf die Themotoleranz hat, aber zu einem vorzeitigen Altern und Absterben der Pflanzen führt. Die erfolgreichen Arbeiten zur Charakterisierung der HsfA1 CS Linien und der Wiederherstellung der Thermotoleranz in entsprechenden Mesophyllprotoplasten hat einen neuen para-genetischen Zugang zur Analyse der komplexen Proteinnetzwerke ermöglicht, die an dem Phänomen der Thermotoleranz beteiligt sind. Dafür wurden im Grundansatz Mesophyllprotoplasten mit Plasmiden transformiert, die für HsfA2 und/oder HsfA3 kodierten und ein Plasmid, das für Luciferase aus Photinus pyralis (Glühwürmchen) als thermosensitivem, leicht nachweisbarem Reporterprotein kodiert. Wir konnten in diesem Messansatz in den Protoplasten den Schutz der Luciferase gegen thermische Denaturierung bei 41°C (30 Minuten) und die nachfolgende Renaturierung für 120 Minuten bei 25°C als Wirkung des zelleigenen Chaperonsystems analysieren. Mit Hilfe von genspezifischen IR-Konstrukten haben wir aber auch die Bildung der entsprechenden RNAi in dem transienten Reporterassay benutzt, um die Bildung einzelner Komponenten des Chaperonsystems zu verhindern und damit ihre Rolle für Proteinfaltung und Proteintopogenese in einem transienten Expressionssystems zu untersuchen

Multilayer Thermal Barrier Coating prepared by EB-PVD process and its structure property correlation

The present work discusses our findings on development of nanostructured Yttria Stabilized Zirconia (YSZ), Lanthanum Zirconate (LZ) coatings, bond coat (NiCrAl) and their Multilayer coatings by electron beam evaporation for potential thermal barrier applications. The YSZ and LZ coatings were found to have cubic FCC phase and amorphous phase respectively. The grain sizes were found to be less than 50 nm in all the layers as observed by AFM and FEG SEM. A detailed cross sectional microstructure and compo-sitional analysis revealed the presence of different layer near to stoichiometry. X-ray diffraction confirmed the formation of desired phases in different layers. The cry-stallite sizes were found to be less than 50 nm, as esti-mated by X-ray diffraction peaks by Debye Sherrer equat-ion. Nanoindentation studies were carried out for study-ing the mechanical behavior of the single and multilayered coatings.Thermal diffusivity was assessed for YSZ coatings

Distribution and Prognostic Significance of Estrogen Receptor α (ERα), Estrogen Receptor β (ERβ), and Human Epidermal Growth Factor Receptor 2 (HER-2) in Thyroid Carcinoma

Purpose. The primary aim of this study was to determine the incidence of estrogen receptor α (ERα), estrogen receptor β (ERβ), and human epidermal growth factor receptor 2 (HER-2) expression in various subtypes of thyroid carcinoma (TC) of follicular origin and the secondary aim was to correlate the expression with various clinicopathologic prognostic factors. Methods. Immunohistochemistry analysis was performed on archival paraffin-embedded tissue sections (1991–2016). ERα, ERβ, and HER-2 expressions were correlated with clinicopathologic prognostic factors, disease recurrence, and overall survival (OS). Results. A total of 264 TC patients were included in the study. Incidences of ERα, ERβ, and HER-2 were 8.1 vs 16.3 vs 13.9% p=0.15, 26.6 vs 11.5 vs 36.1% p=0.002, and 12.9 vs 2.9 vs 0% p=0.003 in papillary thyroid carcinoma (PTC), follicular thyroid carcinoma (FTC), and poorly differentiated thyroid carcinoma (PDTC), respectively. Overall ERα had significant correlation with distant metastases (0.038) and in case of PDTC with multicentricity p=0.037. ERβ had significant correlation with lymph node metastases p=0.023 in FTC. HER-2 correlated with tumor size p=0.027 only on univariate analysis. OS did not correlate with expression of any receptor. Conclusion. ERα, ERβ, and HER-2 have differential expression and prognostic implications in different TC subtypes

A Rapid Method for Determination of Serum Methotrexate Using Ultra-High-Performance Liquid Chromatography–Tandem Mass Spectrometry and Its Application in Therapeutic Drug Monitoring

Objectives Methotrexate (MTX) has anticancer therapeutic potential with multiple doses-related adverse effects and toxicities. Immunoassays for therapeutic monitoring of serum MTX have their own limitations. Liquid chromatography–tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) is considered as the reference method; however, commercially availability of them is limited. We aimed to adapt/develop an in-house LC-MS/MS method for therapeutic monitoring of serum MTX. Materials and Methods Serum protein precipitation was performed using acetonitrile–water containing 250 μM solution of aminoacetophenone as internal standard (IS). Chromatographic separation was achieved on a C18 column with mobile phase of 0.1% solution of formic acid (solvent A) and acetonitrile (solvent B) at a flow rate of 0.4 mL/min. MS was performed under positive ion mode with mass transition for MTX and IS as m/z 455.1→308.1 and 136.2→94.1, respectively. The method was validated by following Bioanalytical Method Validation Guidance for Industry, 2018 and applied on leukemia patients' samples on MTX therapy. Results The correlation coefficient of eight serially diluted calibration standards of 0.09 to 12.5 μM was >0.99 and had linearity with > 95% precision and accuracy at analytical quality control levels. The lower limit of MTX quantification achieved was 0.09 μM with good intensity and sharp peak as compared with blank sample. The total run time of the assay was 5 minutes. The serum MTX levels obtained by this method in leukemia patients exhibited clinical correlation and an excellent agreement with commercial immunoassay used in parallel. Conclusion We were able to develop a rapid, sensitive, and cost-effective LC-MS/MS method suitable for therapeutic drug monitoring of MTX in routine clinical diagnostic laboratories

Investigation of interface, microstructure, and mechanical properties of layered thermal barrier coatings of lanthanum zirconate and YSZ deposited by EB-PVD process

Microstructure of the double-layered ceramic thermal barrier coatings of lanthanum zirconate (LZ) and yttria-stabilized zirconia (YSZ) with bond coat on Ni-based superalloy deposited by electron beam evaporation process has been studied. Two sets of combination of LZ and YSZ were deposited: one LZ over YSZ and the other YSZ over LZ. The interfaces of each layer were studied and were found to be sharp; however, some diffusion of elements from below layer was observed. The detailed selected area diffraction of the phases was carried out from the coating cross-section specimens. The LZ layer was mostly found to be amorphous, and fine columnar growth was observed. The YSZ layer over LZ showed two different crystal structures at interface and at the top surface, which were cubic and tetragonal, respectively. The YSZ layers showed clear columnar grains with feather-like intercalated structure Copyright (c) 2014 John Wiley & Sons, Ltd